Solució diagnòstica innovadora per a la tuberculosi i la DR-TB mitjançant #Macro i Micro-Test!

Una nova arma per al diagnòstic de la tuberculosi i la detecció de la resistència als fàrmacs: una seqüenciació dirigida de nova generació (tNGS) combinada amb l'aprenentatge automàtic per al diagnòstic d'hipersensibilitat a la tuberculosi

Informe bibliogràfic: CCa: un model de diagnòstic basat en tNGS i aprenentatge automàtic, adequat per a persones amb menys tuberculosi bacteriana i meningitis tuberculosa.

Títol de la tesi: Seqüenciació de nova generació dirigida a la tuberculosi i aprenentatge automàtic: una estratègia diagnòstica ultrasensible per a tubulars pulmonars paucífics i meningitis tubular.

Revista: 《Clinica Chimica Acta》

SI: 6,5

Data de publicació: gener de 2024

En col·laboració amb la Universitat de l'Acadèmia Xinesa de Ciències i l'Hospital Tòrax de Pequín de la Universitat Mèdica Capital, Macro & Micro-Test va establir un model de diagnòstic de tuberculosi basat en la tecnologia de seqüenciació dirigida (tNGS) de nova generació i el mètode d'aprenentatge automàtic, que va proporcionar una sensibilitat de detecció ultraalta per a la tuberculosi amb pocs bacteris i la meningitis tuberculosa, va proporcionar un nou mètode de diagnòstic d'hipersensibilitat per al diagnòstic clínic de dos tipus de tuberculosi i va ajudar al diagnòstic precís, la detecció de resistència als fàrmacs i el tractament de la tuberculosi. Al mateix temps, es va trobar que el cfDNA plasmàtic del pacient es pot utilitzar com un tipus de mostra adequat per al mostreig clínic en el diagnòstic de la tuberculosi tuberculosa.

En aquest estudi, es van utilitzar 227 mostres de plasma i mostres de líquid cefaloraquidi per establir dues cohorts clíniques, en què les mostres de la cohort de diagnòstic de laboratori es van utilitzar per establir el model d'aprenentatge automàtic del diagnòstic de tuberculosi, i les mostres de la cohort de diagnòstic clínic es van utilitzar per verificar el model de diagnòstic establert. Totes les mostres van ser primer dirigides per un conjunt de sondes de captura dirigides especialment dissenyades per a Mycobacterium tuberculosis. A continuació, basant-se en les dades de seqüenciació TB-tNGS, el model d'arbre de decisió s'utilitza per realitzar una validació creuada de 5 vegades en els conjunts d'entrenament i validació de la cua de diagnòstic de laboratori, i s'obtenen els llindars de diagnòstic de les mostres de plasma i les mostres de líquid cefaloraquidi. El llindar obtingut es porta a dos conjunts de proves de la cua de diagnòstic clínic per a la detecció, i el rendiment diagnòstic de l'aprenent s'avalua mitjançant la corba ROC. Finalment, es va obtenir el model de diagnòstic de tuberculosi.

Fig. 1 diagrama esquemàtic del disseny de la recerca

Resultats: Segons els llindars específics de la mostra d'ADN del LCR (AUC = 0,974) i la mostra d'ADNc plasmàtic (AUC = 0,908) determinats en aquest estudi, entre 227 mostres, la sensibilitat de la mostra de LCR va ser del 97,01%, l'especificitat va ser del 95,65%, i la sensibilitat i l'especificitat de la mostra de plasma van ser del 82,61% i el 86,36%. En l'anàlisi de 44 mostres aparellades d'ADNc plasmàtic i ADN de líquid cefaloraquidi de pacients amb tuberculosi pulmonar, l'estratègia diagnòstica d'aquest estudi té una alta consistència del 90,91% (40/44) en l'ADNc plasmàtic i l'ADN de líquid cefaloraquidi, i la sensibilitat és del 95,45% (42/44). En nens amb tuberculosi pulmonar, l'estratègia diagnòstica d'aquest estudi és més sensible a les mostres de plasma que els resultats de detecció Xpert de mostres de suc gàstric dels mateixos pacients (28,57% VS 15,38%).

Fig. 2 Rendiment de l'anàlisi del model de diagnòstic de tuberculosi per a mostres de població

Fig. 3 Resultats diagnòstics de mostres aparellades

Conclusió: En aquest estudi es va establir un mètode diagnòstic hipersensible per a la tuberculosi, que pot proporcionar una eina diagnòstica amb la màxima sensibilitat de detecció per a pacients clínics amb tuberculosi oligobacil·lar (cultiu negatiu). La detecció de tuberculosi hipersensible basada en el cfDNA plasmàtic pot ser un tipus de mostra adequat per al diagnòstic de tuberculosi activa i meningitis tuberculosa (les mostres de plasma són més fàcils de recollir que el líquid cefaloraquidi per a pacients sospitosos de tuberculosi cerebral).

Enllaç original: https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/s0009898123004990? via%3Dihub

Breu introducció dels productes de detecció de la sèrie Macro & Micro-Test de tuberculosi

Atesa la complicada situació de la mostra dels pacients amb tuberculosi i les diverses necessitats, Macro & Micro-Test ofereix un conjunt complet de solucions NGS per a l'extracció per liqüefacció de mostres d'esput, la construcció i seqüenciació de biblioteques Qualcomm i l'anàlisi de dades. Els productes cobreixen el diagnòstic ràpid de pacients amb tuberculosi, la detecció de resistència als fàrmacs de la tuberculosi, la tipificació de Mycobacterium tuberculosis i NTM, el diagnòstic d'hipersensibilitat de la tuberculosi negativa per a bacteris i les persones tuberculoses, etc.

Kits de detecció en sèrie de tuberculosi i micobacteris:

Número d'article nom del producte contingut de proves de productes tipus de mostra model aplicable
HWTS-3012 Agent desemmotllant de mostres Utilitzat en el tractament de liqüefacció de mostres d'esput, ha obtingut un número de rècord de primera classe, Sutong Machinery Equipment 20230047. esput
HWTS-NGS-P00021 Kit de detecció quantitativa Qualcomm per a la tuberculosi hipersensible (mètode de captura de sonda) Detecció d'hipersensibilitat no invasiva (biòpsia líquida) per a la tuberculosi pulmonar i els nòduls cerebrals negatius per a bacteris; Es van analitzar les mostres de persones sospitoses d'estar infectades amb micobacteris tuberculosos o no tuberculosos mitjançant metagenòmica de seqüenciació d'alta profunditat, i es va proporcionar la informació de detecció de si hi havia micobacteris tuberculosos o no tuberculosos infectats i la principal informació de resistència a fàrmacs de primera línia de Mycobacterium tuberculosis. Sang perifèrica, líquid de rentat alveolar, hidrotòrax i ascites, mostra de punció focal, líquid cefaloraquidi. Segona generació
HWTS-NGS-T001 Kit de tipificació de micobacteris i detecció de resistència a fàrmacs (mètode de seqüenciació d'amplificació multiplex) Prova de tipificació de micobacteris, incloent-hi MTBC i 187 NTMLa detecció de resistència a fàrmacs de Mycobacterium tuberculosis abasta 13 fàrmacs i 16 llocs de mutació principals de gens de resistència a fàrmacs. Esput, líquid de rentat alveolar, hidrotòrax i ascites, mostra de punció focal, líquid cefaloraquidi. Plataforma dual de segona/tercera generació

Destacats: HWTS-NGS-T001 Kit de tipificació de micobacteris i detecció de resistència a fàrmacs (mètode d'amplificació multiplex)

Introducció del producte

El producte es basa en els principals fàrmacs de primera i segona línia descrits a les directrius de tractament de la tuberculosi de l'OMS, macròlids i aminoglicòsids que s'utilitzen habitualment a les directrius de tractament de la NTM, i els llocs de resistència als fàrmacs cobreixen tot un grup de llocs relacionats amb la resistència als fàrmacs del catàleg de mutacions del complex Mycobacterium tuberculosis de l'OMS, així com altres gens de resistència als fàrmacs i llocs de mutació reportats segons la investigació i les estadístiques de la literatura amb puntuacions altes, tant nacionals com internacionals.

La identificació de la tipificació es basa en les soques de NTM resumides a les directrius de NTM publicades pel Chinese Journal of Tuberculosis and Respiratory Diseases i en el consens d'experts. Els encebadors de tipificació dissenyats poden amplificar, seqüenciar i anotar més de 190 espècies de NTM.

Mitjançant la tecnologia d'amplificació per PCR multiplex dirigida, els gens de genotipificació i els gens resistents als fàrmacs de Mycobacterium es van amplificar mitjançant PCR multiplex i es va obtenir la combinació d'amplicons dels gens diana que es van a detectar. Els productes amplificats es poden construir en biblioteques de seqüenciació d'alt rendiment de segona o tercera generació, i totes les plataformes de seqüenciació de segona i tercera generació es poden sotmetre a una seqüenciació d'alta profunditat per obtenir la informació de seqüència dels gens diana. En comparar-les amb les mutacions conegudes que conté la base de dades de referència integrada (inclòs el catàleg de mutacions del complex Mycobacterium tuberculosis de l'OMS i la seva relació amb la resistència als fàrmacs), es van determinar les mutacions relacionades amb la resistència als fàrmacs o la susceptibilitat als fàrmacs antituberculosos. Combinat amb la solució de tractament de mostres d'esput autooberta de Macro & Micro-Test, es va resoldre el problema de la baixa eficiència d'amplificació d'àcids nucleics de les mostres d'esput clíniques (deu vegades superior a la dels mètodes tradicionals), de manera que la detecció de seqüenciació de resistència als fàrmacs es pot aplicar directament a les mostres d'esput clíniques.

Rang de detecció del producte

34gens relacionats amb la resistència als fàrmacs18fàrmacs antituberculosos i6Es van detectar drogues NTM, que cobrien297llocs de resistència als fàrmacs; deu tipus de Mycobacterium tuberculosis i més de190Es van detectar tipus de NTM.

Taula 1: Informació de 18+6 fàrmacs +190+NTM

Avantatge del producte

Forta adaptabilitat clínica: les mostres d'esput es poden detectar directament amb un agent d'autoliqüefacció sense cultiu.

L'operació experimental és senzilla: la primera ronda d'operació d'amplificació és senzilla i la construcció de la biblioteca es completa en 3 hores, cosa que millora l'eficiència del treball.

Tipificació i resistència als fàrmacs integrals: cobrint els llocs de tipificació i resistència als fàrmacs de MTB i NTM, que són els punts clau de preocupació clínica, tipificació precisa i detecció de resistència als fàrmacs, compatible amb programari d'anàlisi independent i generació d'informes d'anàlisi amb un sol clic.

Compatibilitat: compatibilitat del producte, adaptant-se a les plataformes ILM i MGI/ONT convencionals.

Especificació del producte

Codi de producte nom del producte Plataforma de detecció especificacions
HWTS-NGS-T001 Kit de tipificació de micobacteris i detecció de resistència a fàrmacs (mètode d'amplificació multiplex) ONT、Illumina、MGI、Salus pro 16/96rxn

Data de publicació: 23 de gener de 2024